腸道菌群在人體代謝性疾病中扮演著重要角色，甚至被稱為“人類的第二大腦”。近年來(lái)，越來(lái)越多的腸道菌群相關(guān)項(xiàng)目得到了國(guó)家自然基金資助，同時(shí)也涌現(xiàn)了許多探究腸道菌群深層機(jī)制的高分優(yōu)秀文章。
但由于腸道菌群的構(gòu)成非常復(fù)雜，因此一直缺乏對(duì)功能性分子或小分子代謝物的相關(guān)研究。那么，該從哪方面切入去開展研究，才能兼?zhèn)鋭?chuàng)新性和實(shí)用性呢？和小編一起來(lái)看看這篇文章吧！
近日，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部姜長(zhǎng)濤教授聯(lián)合北京大學(xué)第三醫(yī)院喬杰院士、化學(xué)學(xué)院雷曉光教授等多研究團(tuán)隊(duì)在Science雜志發(fā)表了研究成果[1]，首次提出了腸道菌源宿主同工酶新概念，發(fā)現(xiàn)：菌源宿主同工酶在腸道中廣泛存在，能夠模擬宿主酶的功能，參與疾病的發(fā)生發(fā)展；此外，還發(fā)現(xiàn)了首個(gè)對(duì)菌源DPP4具有高活性和強(qiáng)選擇性的小分子抑制劑Dau-d4，可通過(guò)特異性抑制菌源DPP4，改善糖耐量異常，為靶向腸道菌群的代謝性疾病的精準(zhǔn)化治療帶來(lái)新突破。
一、研究?jī)?nèi)容與思路
1、微生物-宿主同工酶的功能篩選
研究者建立了一個(gè)篩選平臺(tái)來(lái)鑒定可能影響宿主功能的微生物-宿主同工酶，收集了3名健康志愿者的新鮮糞便樣本以及小鼠的新鮮糞便樣本，對(duì)110種在各種人類疾病中起作用的酶進(jìn)行了篩選。利用該系統(tǒng)，研究者發(fā)現(xiàn)71種酶在腸道菌群中存在同工酶，而這些酶種類多樣、功能全面，提示菌源宿主同工酶在腸道中廣泛存在，可能有效模擬宿主酶的功能。
在所有的人類樣本中，菌源宿主同工酶活性最高的是DPP4。此外，飼養(yǎng)在普通環(huán)境的小鼠糞便中，DPP4活性顯著高于無(wú)菌小鼠。DPP4是一個(gè)常用的2型糖尿病治療靶點(diǎn)，腸道DPP4是降解GLP-1調(diào)節(jié)葡萄糖耐量所必需的。
基于上述理論基礎(chǔ)，研究者給予無(wú)菌小鼠廣譜抗生素灌胃處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠腸外組織和血漿的GLP-1活性和總水平卻沒(méi)有變化。但當(dāng)給小鼠喂食HFD且增加了腸道屏障通透性或給予低濃度葡聚糖硫酸鈉（DSS）或吲哚美辛增加腸通透性后，發(fā)現(xiàn)可見(jiàn)DPP4活性增加和GLP-1活性降低，糖耐量異常。
研究思路：研究者構(gòu)建了一個(gè)新的篩選平臺(tái)，在人類以及小鼠新鮮糞便樣本發(fā)現(xiàn)了菌源宿主同工酶的存在，并以最活躍的DPP4為研究對(duì)象開展后續(xù)研究。首先，研究者探索了“在什么情況下會(huì)影響腸道DPP4以及GLP-1”，以便開展后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、產(chǎn)生DPP4的細(xì)菌的鑒定
進(jìn)一步，研究者鑒定了DPP4的微生物生產(chǎn)者。通過(guò)腸道共生菌株的分離培養(yǎng)、DPP4活性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)了多形擬桿菌、普通擬桿菌等多種擬桿菌屬細(xì)菌均具有菌源DPP4活性。同時(shí)，研究者還發(fā)現(xiàn)菌源DPP4（btDPP4）對(duì)GLP-1活性最強(qiáng)，甚至高于人類DPP4（hDPP4）。
研究思路：明確了“在腸道屏障受損時(shí)DPP4會(huì)發(fā)生變化”后，研究者進(jìn)一步定位了分泌DPP4影響腸道的具體菌群，為后續(xù)構(gòu)建動(dòng)物模型作鋪墊。
3、微生物DPP4破壞宿主葡萄糖穩(wěn)態(tài)
研究者探究了DPP4在宿主葡萄糖代謝中的作用，采用CRISPR-Cas4系統(tǒng)并構(gòu)建多種小鼠模型來(lái)過(guò)表達(dá)或沉默DPP4進(jìn)行研究，給予HFD破壞了腸道屏障，最終發(fā)現(xiàn)：多形擬桿菌可以以btDPP4依賴的方式降低宿主活性GLP-1水平，誘導(dǎo)糖耐量異常。
研究思路：第二步研究發(fā)現(xiàn)多形擬桿菌會(huì)分泌DPP4，加上已有相關(guān)研究表明“DPP4是2型糖尿病的疾病治療靶點(diǎn)之一”，基于此，研究者驗(yàn)證了在小鼠模型中，DPP4在葡萄糖代謝中發(fā)揮的作用，與第一步研究相呼應(yīng)，同時(shí)點(diǎn)明了btDPP4的重要作用。
4、臨床DPP4抑制劑不抑制微生物DPP4
研究者研究了DPP4抑制劑西格列汀是否可以抑制微生物DPP4，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，西格列汀對(duì)btDPP4的抑制作用較弱。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，可能原因是btDPP4-西格列汀復(fù)合物結(jié)構(gòu)存在弱TMTP接觸導(dǎo)致的，可變V/VI接頭基序可能是西格列汀對(duì)不同DPP4抑制效果不同的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
研究者進(jìn)一步開展了西格列汀臨床試驗(yàn)和動(dòng)物研究，采用多組學(xué)關(guān)聯(lián)分析、菌群移植、噬菌體靶向干預(yù)等多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)多形擬桿菌產(chǎn)生的btDPP4影響了西格列汀的治療效果，解釋了為什么西格列汀抑制效果因人而異。此外，還表明，后續(xù)需要抑制hDPP4和btDPP4，以更有效地改善葡萄糖穩(wěn)態(tài)。
研究思路：西格列汀是臨床常用DPP4抑制劑，但療效因人而異，原因一直有待發(fā)掘。研究者探究了西格列汀是否能影響btDPP4，結(jié)果顯示影響較小，可能原因是：西格列汀只影響了hDPP4而弱作用btDPP4，導(dǎo)致治療效果較差。這一步將科研與臨床實(shí)際相結(jié)合，提出了適合的臨床治療改進(jìn)方案。
5、Dau-d4是一種特異性btDPP4抑制劑
研究者建立了一種使用btDPP4蛋白的高通量藥物篩選系統(tǒng)，通過(guò)對(duì)約107,000個(gè)小分子化合物的高通量篩選，發(fā)現(xiàn)了蝙蝠葛蘇林堿（Dau）具有最強(qiáng)的btDPP4抑制活性，但對(duì)hDPP4沒(méi)有抑制作用。
進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)改造與活性評(píng)價(jià)顯示，Dau的衍生物Dau-d4對(duì)菌群DPP4有著很強(qiáng)的抑制作用，還對(duì)hDPP4存在一定抑制作用，從而在不影響腸道共生菌的生長(zhǎng)與組成的情況下改善了糖代謝紊亂。
研究思路：既然提出了疑問(wèn)，那就需要尋找適合的解決方法——研究者采用高通量藥物篩選系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)了Dau，通過(guò)驗(yàn)證其功能后發(fā)現(xiàn)存在一定的缺陷，因此后續(xù)在此基礎(chǔ)上不斷地挖掘，最終發(fā)現(xiàn)了衍生物Dau-d4。
6、Dau-d4改善葡萄糖穩(wěn)態(tài)
接下來(lái)，研究者探究了Dau-d4在小鼠中的具體治療效果，針對(duì)Dpp4-/-小鼠、ob/ob小鼠等多種動(dòng)物模型給予HFD、DSS飲水等條件以及Dau-d4治療，發(fā)現(xiàn)Dau-d4均可以通過(guò)抑制btDPP4，增加活性GLP-1，改善糖耐量異常，且不會(huì)對(duì)腸道菌群生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制，也不存在肝腎毒性。除此之外，Dau-d4與西格列汀聯(lián)合治療還可以改善西格列汀單獨(dú)治療帶來(lái)的副作用。
研究思路：發(fā)現(xiàn)了抑制藥物之后，接下來(lái)便是驗(yàn)證藥物的療效、安全性以及與當(dāng)前臨床治療藥物西格列汀的比較或聯(lián)合治療效果。
二、小結(jié)
菌源DPP4可能是2型糖尿病的治療靶點(diǎn)，而DPP4抑制劑Dau-d4可以在不干擾菌群整體功能的條件下，特異性靶向菌源DPP4，同時(shí)對(duì)人DPP4存在一定抑制作用，有效改善代謝紊亂，是潛在的治療2型糖尿病的新型藥物。
該研究開發(fā)了一種鑒定未表征的腸道微生物-宿主同工酶的新策略，篩選出活性最高的主角DPP4，之后開展了一段“發(fā)現(xiàn)靶點(diǎn)--機(jī)制驗(yàn)證--藥物篩選和療效驗(yàn)證”的全鏈條研究體系，為開發(fā)新治療方法提供了可能。
2023-9-5 |
